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技術文章

當前位置:首頁技術文章分子互作實驗CLIP交聯免疫共沉淀

分子互作實驗CLIP交聯免疫共沉淀

更新時間:2025-07-14點擊次數:250

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一、技術簡介

CLIP(Cross-linking immunoprecipitation,交聯免疫共沉淀)通過結合UV交聯和免疫共沉淀的方法來分析蛋白與RNA相互作用的結合位點。


二、技術原理

CLIP技術利用紫外線照射使細胞內的RNA與RNA結合蛋白(RBP)發生共價交聯,隨后通過免疫沉淀的方法富集與特定RBP結合的RNA片段,再經過逆轉錄和高通量測序等步驟,獲取RBP在體內的RNA結合位點和結合序列信息。

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三、應用場景

1.蛋白質-RNA相互作用研究:確定特定蛋白質在體內的RNA結合位點和結合序列,揭示蛋白質在轉錄后調控中的作用機制。

2.疾病相關研究:通過比較正常和疾病狀態下RBP的RNA結合情況,發現與疾病發生、發展相關的RNA結合事件和調控網絡。

3.藥物研發:為藥物研發提供新的靶點和作用機制,幫助開發針對特定RNA結合蛋白或其調控的RNA分子的藥物。

4.生物信息學分析:通過對CLIP-seq數據的生物信息學分析,預測RNA結合蛋白的結合位點和結合模式,構建RNA調控網絡等。


四、技術優勢

1.體內原位檢測:能夠在活體細胞內捕獲蛋白質和RNA的相互作用,真實反映體內的生理狀態。

2.較高特異性和嚴格的純化:通過特異性抗體或標簽純化交聯復合物,可有效去除非特異性結合的RNA和蛋白質,提高結果的可信度。

3.結合高通量測序:與高通量測序技術結合,可在全基因組范圍內鑒定RBP的RNA結合位點和結合序列,獲取豐富的信息。


五、樣本類型

新鮮細胞(貼壁細胞/懸浮細胞),紫外交聯后細胞樣本。


六、樣本需求

細胞樣本:約1×10^7個(可以是1個10cm皿,或以懸浮細胞形式存儲于離心管中,或1個T75瓶);

交聯細胞樣本:254 nm,150 mJ/cm2標準UV交聯處理細胞。


七、樣本準備&運輸

活細胞樣本:距離較近的可以將養在皿/T75瓶/離心管內的新鮮細胞樣本常溫快遞(最遲次日達)運輸,本市內可閃送或親自遞送;

交聯后細胞樣本:-80℃凍存干冰運輸。


八、需提供的試劑

檢測用ChIP級抗體。


九、實驗周期

1-2周(不包含測序)


十、其他

后續檢測選擇RT PCR時,需提供后續檢測的位點。

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